előremenő szórás vs. oldalsó szórás

az áramlási citometria az egysejtű elemzés módszere, amely magában foglalja a sejt fizikai tulajdonságainak jellemzését. Áramlási citométerben a sejtpopulációt tiszta sóoldatban szuszpendáljuk. A szuszpenziót egy fúvókán keresztül vezetik, amely egycellás áramot kovácsol. A populáció ezután egy sejtenként egy lézerfényforrás mellett halad el. Miközben a lézerek kihallgatják, a sejt szórja a fényt (1). Az 1. ábra áttekintést nyújt az áramlási citométer vázlatáról.

 Optikai Rendszer.PNG

1.ábra. Áramlási citométer optika sematikus (2).

a sejtméret és a lézer hullámhossz közötti arány megváltoztatja a szórás viselkedését. Ha a sejt mérete kisebb, mint a lekérdező lézer gerjesztése, a szórás viselkedése következetlen és alacsony intenzitású. Ennek megfelelően a lézer általában a vizsgált részecskéknél rövidebb hullámhosszon bocsát ki fényt. A 488 vagy 405 nm hullámhossz gyakori (1).

a fény szórását két optikai detektor méri. Az egyik detektor a szórást méri a lézer útja mentén (1). Ezt a paramétert előre szórásnak (FSC) nevezik. A másik detektor mérései a lézerhez képest kilencven fokos szögben szóródnak (1). Ezt a paramétert side scatter (SSC) – nek hívják. Együtt mérve ez a két mérés lehetővé teszi bizonyos fokú sejtdifferenciálódást egy heterogén populáción belül.

az előremenő szórás mérése lehetővé teszi a sejtek méret szerinti megkülönböztetését. Az FSC intenzitása arányos a sejt átmérőjével, és elsősorban a sejt körüli fénydiffrakciónak köszönhető. Az előre szórást egy fotodióda érzékeli,amely a fényt elektromos jellé alakítja. Az előállított feszültség intenzitása arányos a vizsgált cella átmérőjével (1).

az FSC hasznos az immunrendszer sejtjeinek megkülönböztetésében. A monociták és a limfociták a fehérvérsejtek két csoportja. Általában a monociták nagyobbak, mint a limfociták, és nagyobb intenzitású előre szóródást mutatnak.

2. ábra. Lymphocyták és monocyták megkülönböztetése flowjo-ban, a szórási paraméterek alapján. Megjegyzés: Ez a példa csak illusztrációs célokat szolgál, az ábrázolt populációk vagy nem tényleges monocita / limfocita sejtek, vagy a beteg akut monocitózist mutat.

az oldalsó szórás mérése információt nyújt a cella belső összetettségéről (azaz szemcsézettségéről). A lézer és az intracelluláris struktúrák közötti interfész okozza a fény törését vagy visszaverődését. Az oldalsó szóródást növelő sejtkomponensek közé tartoznak a granulátumok és a mag (1).

az előremenő szóráshoz képest az oldalsó szórásból származó fényjelek gyengék. Az oldalsó szórás mérésére fotoszorzócsövet (PMT) használnak, mert ez egy érzékenyebb optikai detektor (1).

az oldalsó szórás hasznos a különböző összetettségű sejtek azonosításához. Például monociták és granulociták. A granulocitákat a citoplazmatikus granulátumok nagy mennyisége jellemzi. A szemcsék fényvisszaverődése növeli az SSC mérés intenzitását, és lehetővé teszi a granulociták és a monociták közötti megkülönböztetést (1).

3. ábra. A granulociták és monociták megkülönböztetése a FlowJo-ban a szórási paraméterek alapján.

minden jelre (azaz elektromágneses impulzusra), amely egy detektorba (PMT vagy fotodióda) jut, három jellemző rögzíthető: magasság, szélesség és terület. Míg az impulzus terület leggyakrabban jelentett, vannak különböző előnyei és hátrányai az egyes. A szórási paramétereken belül az impulzusmagasság és az impulzusszélesség diagramokat a citométeren áthaladó egyes sejtek izolálására használják, és ezáltal eltávolítják a nem egyetlen sejteket (dubletteket, csomókat vagy törmeléket).

4. ábra. Az egyes cellák megkülönböztetése a szórási magasságtól a szórási szélesség paramétereitől A flowjo-ban.

egy áramlási citométer egyidejűleg méri az FSC – t és az SSC-t, és a két paraméter együttesen meglehetősen jó alapot nyújt a sejtpopuláció elemzésének megkezdéséhez. Vannak további módszerek a sejtek számszerűsítésére, de nagyon sok információ nyerhető a szórási adatokból.

  1. Shapiro, Howard. Gyakorlati Áramlási Citometria. New York, Alan R. Liss, 1985.

  2. egy tipikus áramlási citométer beállítás sematikus áttekintése. 2016, SelectScience.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.